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發(fā)布時(shí)間：2016-12-14

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2017年4月7-9日（南京）
第十期CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術(shù)學(xué)習(xí)班邀請函

南京大學(xué)模式動物研究所趙慶順等教授在2016年9月15日的《Genome Biology》上發(fā)表了關(guān)于新DNA編輯工具——SGN的文章。該工具與CRISPR、TALEN、NgAgo等工具相比，最大的特點(diǎn)就是不受靶序列的限制。文章指出，SGN能特異性識別和捕獲目標(biāo)，來準(zhǔn)確切割任何DNA序列。
為讓更多從事醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)事業(yè)的研究人員及時(shí)掌握基因組靶向修飾新技術(shù)，更高質(zhì)量地完成科研任務(wù)，定于4月上旬在南京舉辦CRISPR/Cas9基因靶向修飾技術(shù)學(xué)習(xí)班。
屆時(shí)南京大學(xué)趙慶順教授親自教會你如何使用CRISPR/Cas9技術(shù)。學(xué)員除在全面了解基因組編輯理論知識之外，均可在專業(yè)人員指導(dǎo)下，獨(dú)立完成以CRISPR/Cas9技術(shù)進(jìn)行基因組編輯研究的系列實(shí)驗(yàn)；參會人員更可提前準(zhǔn)備好自己科研中遇到的問題，通過三天現(xiàn)場的 “講座 + 實(shí)驗(yàn) + 答疑”的學(xué)習(xí)和交流，有機(jī)會全面掌握CRISPR/Cas9技術(shù)應(yīng)用的方法及技巧；
本次報(bào)名參加可以免費(fèi)獲得一份CRISPR/Cas9三合一對照質(zhì)粒（含CMV啟動子驅(qū)動的人源化Cas9表達(dá)構(gòu)件、爪蛙Ef1a啟動子驅(qū)動的綠色熒光蛋白篩選標(biāo)記表達(dá)構(gòu)件、以及人U6啟動子驅(qū)動的靶向識別人P53基因的sgRNA表達(dá)構(gòu)件---含可用于制備sgRNA體外轉(zhuǎn)錄模板的sgRNA骨架模板）。

日程安排
第一天上午9:00-12:00
理論一、基因組靶向修飾技術(shù)簡介
1、基因功能研究的分子遺傳學(xué)技術(shù)簡介
2、基于NHEJ修復(fù)的基因敲除和基于HR修復(fù)的基因敲入 3、ZFN和TALEN技術(shù)
4、CRISPR-Cas9技術(shù)
理論二、CRISPR的設(shè)計(jì)
1、目標(biāo)基因結(jié)構(gòu)及功能的生物信息學(xué)分析
2、CRISPR的設(shè)計(jì)原則
3、CRISPR的在線設(shè)計(jì)
第一天下午13:00-17:00
理論三、基因組編輯工具遞送至生物體細(xì)胞內(nèi)的策略
1、靶向編輯基因的基因型確認(rèn)
2、基因組編輯工具之DNA表達(dá)元件的制備與遞送策略 3、基因組編輯工具轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物制備及遞送策略
4、基因編輯工具RNP的制備與遞送策略
實(shí)驗(yàn)（或技術(shù)細(xì)節(jié)答疑）一： CRISPR/Cas9 基因組編輯工具All-in-One表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建（1）
1、CRISPR模板引物的訂購 2、CRISPR模板的退火 3、退火CRISPR模板與線性化CRISPR/Cas9 All-in-One載體的重組
4、大腸桿菌的轉(zhuǎn)化 5、轉(zhuǎn)化子的涂板培養(yǎng)

第二天上午9:00-12:00
理論四、sgRNA活性驗(yàn)證
1、體外法
2、體內(nèi)法
2.1 插入缺失（Indel）突變檢測的基本策略
2.2 基于胚胎反應(yīng)器的活性驗(yàn)證方法 2.3 基于細(xì)胞系的活性驗(yàn)證方法
實(shí)驗(yàn)（或技術(shù)細(xì)節(jié)答疑）二：CRISPR/Cas9 基因組編輯工具All-in-One表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建（2）
基因組編輯工具之CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的快速驗(yàn)證法（PCR法）
實(shí)驗(yàn)（或技術(shù)細(xì)節(jié)答疑）三：基因組編輯子等位基因的基因型鑒定
1、基因組DNA模板制備
2、目標(biāo)基因的基因組DNA片段的PCR擴(kuò)增
理論五、利用CRISPR技術(shù)創(chuàng)建基因組編輯人及動物細(xì)胞系
1、創(chuàng)建基因組編輯細(xì)胞系的基本過程
2、基因敲入供體DNA的設(shè)計(jì)原則及基因敲入供體設(shè)計(jì)實(shí)例
3、表達(dá)CRISPR的All-in-One表達(dá)質(zhì)粒（和供體）導(dǎo)入細(xì)胞系的方法 4、陽性細(xì)胞克隆篩選 5、靶向突變的基因型鑒定及基因組編輯細(xì)胞系的建立 6、敲入基因和敲除基因（無效等位基因）的確認(rèn) 7、建立基因組編輯細(xì)胞系的優(yōu)選策略

第二天下午13:00-17:00
理論六、利用CRISPR技術(shù)創(chuàng)建基因敲除或敲入動物
1、創(chuàng)建基因組編輯動物突變體的基本過程
2、sgRNA/Cas9 mRNA（和供體）共顯微注射入受精卵中建立初建者
3、初建者體細(xì)胞攜帶靶向突變等位基因的確認(rèn)
4、基因敲除/敲入動物（F1）的鑒定
5、基因敲除/敲入動物品系（F2）的建立
6、敲除/敲入基因的確認(rèn)
7、建立基因敲除或敲入突變體動物的優(yōu)選策略
理論七、利用CRISPR技術(shù)創(chuàng)建基因敲除或敲入植物
1、創(chuàng)建基因組編輯植物突變體的基本過程
2、雙元載體的轉(zhuǎn)染
3、基因敲除/敲入植物（F1）鑒定
實(shí)驗(yàn)（或技術(shù)細(xì)節(jié)答疑）四：實(shí)驗(yàn)結(jié)果的點(diǎn)評與討論
1、CRISPR/Cas9 All-in-One重組子的PCR產(chǎn)物電泳檢測結(jié)果點(diǎn)評
2、基因組編輯等位基因的基因型鑒定電泳檢測結(jié)果的點(diǎn)評 3、測序是驗(yàn)證基因組編輯結(jié)果的金標(biāo)準(zhǔn)

第三天上午9:00-12:00（下午12:00以后課程結(jié)束）
理論八、基因組編輯技術(shù)的脫靶問題
1、脫靶的產(chǎn)生原因
2、脫靶檢測
3、解決脫靶問題的方法
4、脫靶問題對不同領(lǐng)域研究者的意義
理論九、利用CRISPRi或CRISPRa技術(shù)調(diào)控基因在細(xì)胞中的表達(dá)
1、dCas9的特征簡介
2、運(yùn)用CRISPR技術(shù)調(diào)控基因在細(xì)胞中表達(dá)的基本實(shí)驗(yàn)過程
3、CRISPR技術(shù)的轉(zhuǎn)錄抑制
4、CRISPR技術(shù)的轉(zhuǎn)錄活化
理論十、CRISPR技術(shù)的倫理學(xué)問題
1、新型基因組編輯技術(shù)的發(fā)展（堿基編輯）
2、基因組編輯技術(shù)的應(yīng)用
3、基因組編輯技術(shù)對未來社會的革命性的影響 4、基因組編輯技術(shù)的倫理學(xué)問題

【主辦單位】上海瑋瑜生物科技有限公司
【時(shí)間地點(diǎn)】 2017年4月7-9日南京市江北新區(qū)
【住宿】
為了便于接送、統(tǒng)一指定南京龍華大酒店，住宿自理
標(biāo)準(zhǔn)間（含早）280元/人合住140元/人南京浦口區(qū)江浦街道龍華路2號近南京工業(yè)大學(xué)浦口校區(qū)
【收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)】
3300元/人 (不含住宿費(fèi)) 授課期間發(fā)放紙質(zhì)邀請函（蓋章）按交費(fèi)先后順序確定名額及座位，注冊費(fèi)包含教材、午餐等費(fèi)用。
【付款方式】
1，轉(zhuǎn)賬或支付寶：
A：銀行轉(zhuǎn)賬
賬戶名稱：上海服淡信息科技有限公司賬戶號：31578103002581719
開戶行：上海銀行桃浦支行
B：支付寶轉(zhuǎn)賬
收款人：wybiot@163.com 支付寶戶名:上?，|瑜生物科技有限公司
2，現(xiàn)場刷卡或現(xiàn)金（支持刷公務(wù)卡）
聯(lián)系人：謝老師 13611825136 指定報(bào)名郵箱：sci1976@126.com

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